Enzyme¶
2026¶
Abstract
- 使用对硝基苯胺（pNA）显色底物测定氨基肽酶活性
- 酶活性测量校正：（1）使用仅含底物（无土壤）的对照处理，校正培养过程中底物的非生物水解；（2）使用仅含土壤（无底物）的对照处理，校正溶解性土壤有机质造成的干扰；（3）使用单点吸附处理，将土壤与pNA共培养，校正测定过程中土壤组分对pNA的吸附导致的不完全回收。酶活性测定及对照实验均需设置重复
- 使用线性混合效应模型，说明固定效应、随机效应、分类/连续变量
Abstract
- 风干导致水分流失和土壤溶液中的酶吸附到土壤胶体，并由于酶活性位点难以接触底物、酶结构改变、pH差异、底物向吸附酶扩散受限等因素导致比土壤溶液中酶更低的活性
- 大多数酶活性不受储存时长影响，而取决于储存方式（风干、冷藏、冷冻）
Abstract
- 土壤酶活性基质在使用NaOH或Tris碱化时，需添加CaCl2作为絮凝剂；其中NaOH碱化易产生以Ca(OH)2为基础的沉淀物，并导致对酶活性的高估；使用Tris碱化可避免沉淀问题
2025¶
Abstract
- 改变凋落物输入条件下土壤胞外酶与土壤呼吸的关联研究
- 添加凋落物提高了纤维素酶活性，而移除凋落物则降低了其活性
- 无论是添加还是移除凋落物，均未对木质素酶活性产生影响
Abstract
- 即使采用荧光底物测量，20cm以下土层的风干土壤酶活性极低
2024¶
Abstract
- 土壤氮水解酶活性的 pH 最适值主要因酶类型而异
Note
- 使用 pNA 测定氨肽酶的方法：称取1g风干土壤样品，与5mL MUB缓冲液溶解的==2mM==底物溶液混合，在37°C孵育24h，反应终止时加入4mL 0.1M pH12 Tris缓冲溶液以回收产物，并加入1mL 2M CaCl2溶液使沉积物絮凝
2023¶
Danger
- 土壤酶活性所代表的意义以及如何正确或错误地解读这些活性
- 目前对土壤酶如何催化养分元素的水解或氧化反应仍缺乏深入理解：（1）酶不仅来源于微生物，也可能由植物产生，仅凭土壤酶活性无法推断土壤微生物活动，也无法据此判断微生物对养分的限制或需求；（2）忽视了酶促反应的所有产物均含有一定量的碳：仅凭β-葡萄糖苷酶活性无法全面表征所有参与碳循环的酶，更遑论完整地刻画土壤碳循环；NAG 是水解以氨基糖为骨架的聚合物，最终释放出碳氮摩尔比为 6:1 的产物；（3）土壤水解酶（如 NAG）是胞外酶：将胞外酶活性用作微生物“生长与活性”的替代指标是不恰当的；某一特定土壤中的磷酸单酯酶（PME）活性会沿着整个 pH 梯度呈现出难以预测的变化规律
- 大多数酶并不“矿化”营养元素：矿化是指将营养元素的有机形态最终转化为无机形态的过程；大多数酶属于水解酶类，并不直接参与化合物的矿化，而是通过降解聚合物来发挥作用；酶并不代表释放植物可利用形态的最终步骤，只是反映了该化合物可能的降解速率
- 事后归因式的解释：宏观尺度过程与编码酶的基因之间所假定的关联在很大程度上并不可靠；酶既可促进碳封存，又可导致碳矿化，这二者如何并存？底物对酶活性的诱导作用可以与产物的反馈抑制同时发生。酶活性可以且确实会被同时以截然相反的方式解读。
- 相关性并不意味着因果关系，也并不等同于生物物理层面的共定位现象：仅凭相关性不足以解读任何土壤健康指标的功能意义；土壤酶谱学方法已明确揭示了土壤有机质与酶活性之间的生物物理脱钩现象
- 认为土壤酶活性数据应当“简便、经济、易行”的假设，充其量值得商榷，最坏的情况则会危及数据质量；为何不先确认在底物充足的情况下，酶活性确实已接近最大值，从而避免在不同处理间出现假阴性结果呢？（理解：需优先进行酶促反应动力学试验）
Abstract
- 蛋白质，又称肽链，是由氨基酸组成的长链聚合物，首先被分解为较短的寡肽，进而转化为游离氨基酸，供土壤微生物直接利用；随后，这些游离氨基酸还可进一步脱氨，释放出铵态氮（N），供微生物和作物吸收。
Note
- 使用 pNA 测定氨肽酶的方法：于50mL离心管中，放入相当于1g烘箱干燥土样的鲜土，与5mL 1mM pNA底物溶液混合，在37°C孵育24h，反应终止时加入4mL 0.1M pH12 Tris缓冲溶液以回收产物，并加入1mL 2M CaCl2溶液使沉积物絮凝；Tris缓冲溶液用于提高产物的提取效率并避免氨肽酶底物发生非生物水解；离心后在380nm测定pNA吸光度。
- 本文中对照 pNP 测定BG方法：底物10mM，孵育时间1h。
2022¶
Abstract
- {ISO 20130:2018}标准研究论文，可引用
Abstract
- pNA 吸光度最大吸收峰位于379nm，不随 pH 变化而改变，无需进行碱化处理；碱化会加剧 pNA 底物的非生物水解
- 亮氨酸氨肽酶、甘氨酸氨肽酶
2021¶
Abstract
- 酯类底物的非生物水解程度最低，酰胺类底物的非生物水解程度最高
- 对硝基苯酚（pNP）和对硝基苯胺（pNA）底物在测定中使用0.1M Tris缓冲液代替0.5M NaOH进行碱化处理
2019¶
Abstract
- 亚高山森林，包含针叶和阔叶树种
- L层由乔木及林下植被的新鲜或微分解凋落物组成；F层为部分分解凋落物，其来源基本可辨识；H层为已无法辨识来源的分解有机质
- 比色法测定分层凋落物酶活性并计算酶化学计量比
- 测定磷脂脂肪酸（PLFA）评估微生物生物量随森林地被层和树种的变化，并将其作为微生物群落结构活力的指标
2018¶
Abstract
- 种子防御酶——多酚氧化酶、过氧化物酶、几丁质酶和草酸氧化酶
2017¶
Abstract
- 土壤酶活性通常通过将缓冲液处理过的土壤悬浊液与显色或荧光底物类似物共同孵育来测定，随后定量测定释放出的显色或荧光产物，并根据孵育时间进行校准。
- 对硝基苯酚在pH<5.6时无色，而在pH>7.6时呈黄色。
- MUF在NaOH存在下并不稳定，必须在几分钟内完成检测。
2014¶
Abstract
- 包含原位凋落物采样，未区分凋落物层次；测定原位凋落物酶活性；植物物种叶片养分重吸收
- 比酶活性（SEA）：\(SEA=A/(C_{mic}*0.001)\)，其中A表示酶活性、Cmic表示微生物生物量碳浓度（mg/g）